Protocollo per un DAPI Stain

Protocollo per un DAPI Stain


DAPI significa chimico 4'-6-Diamidino-2-fenilindolo, e viene utilizzato per colorare DNA a doppio filamento. Il composto forma complessi fluorescenti blu con i nuclei delle cellule e così è usato comunemente per evidenziare la struttura delle cellule. Il tipo e la densità di colorazione anche in grado di identificare le cellule morte o morenti.

Preparazione Soluzione DAPI

La soluzione DAPI prima deve essere diluito ad una soluzione di lavoro. Per esempio, 10 mg del prodotto Invitrogen DAPI deve essere miscelato con 2 mL di acqua deionizzata, e poi ulteriormente diluiti a 300 concentrazione nano-molare (indicazioni saranno presenti sul prodotto) con tampone fosfato salino (PBS).

Preparazione del campione

Fissare il campione come appropriati per il tipo di campione da analizzare in una diapositiva. Aggiungere 300 microlitri della soluzione di lavoro DAPI al campione e incubare per uno a cinque minuti. Sciacquare il vetrino con PBS.

Analizzare

Utilizzare un microscopio a fluorescenza a guardare il campione montato-scivolo. I nuclei DAPI macchiate possono essere identificati da una fluorescenza blu.


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