Protocolli per la Hoechst colorazione

Protocolli per la Hoechst colorazione


Le macchie Hoechst sono coloranti fluorescenti utilizzati per l'etichettatura di DNA e RNA attraverso la microscopia a fluorescenza e citometria a flusso tecniche. Hoechst 33258 e la Hoechst 33342 sono i più utilizzati di queste macchie. Essi hanno la capacità di legarsi alle molecole di DNA, causando i nuclei e mitocondri ad apparire fluorescenti ai raggi ultravioletti. Protocolli per la colorazione Hoechst sono pratica comune nei laboratori biotecnologici e genetica, e comprendono tecniche di colorazione delle cellule utilizzando sia Hoechst 33258 e la Hoechst 33342.

Hoechst 33342 HSC colorazione e purificazione delle cellule staminali protocollo

Questo protocollo è utilizzato per colorare le cellule provenienti da topi midollo osseo. I tecnici preparano campioni di midollo osseo con soluzione HBSS + sale, tampone HEPES e siero fetale di vitello. Filano la soluzione e aggiungere un supporto pre-riscaldato DMEM. Si aggiunge quindi macchia Hoechst. La soluzione si trova in un 98,6 gradi Fahrenheit bagnomaria per esattamente 90 minuti, riporta il Dipartimento di Immunologia presso l'Università di Pittsburgh. Segmenti di DNA appaiono luminescenti sotto un citometro.

Hoechst 33342 DNA colorazione

Durante questo protocollo, i tecnici sospesi Hoechst 33342 macchia in acqua distillata, aggiungere siero fetale di vitello 2 per cento al campione cellulare, mantenendo il pH a 7,2 con l'aiuto di una soluzione tampone. Le cellule vengono poi incubate a 98,6 ° C per un'ora, e subito analizzati con un pezzo di equipaggiamento chiamato citometro.

DNA macchiato è quindi visibile e fluorescenti, secondo l'Università del Michigan Health System.

Rilevamento del DNA Utilizzando il DNA-binding Fluorocromo Hoechst 33258

Questi protocolli utilizzato un pezzo di equipaggiamento chiamato spettrofotometro per analizzare DNA e RNA segmenti. I tecnici usano Hoechst 33258 Soluzione di lavoro e del polpaccio campioni di DNA del timo. Fanno anche una soluzione separata con il campione di DNA e di una sostanza chimica chiamata bromuro di etidio. Più tardi, si confrontano i risultati della colorazione delle cellule in entrambi i supporti, utilizzando uno spettrofotometro, secondo i protocolli attualmente in Citometria.


articoli Correlati